Q:使用贵司的***试剂盒或技术服务有发表过文章吗?是否可以提供参考?

A:有,请您参考网页顶部“案例展示”部分,其中不乏客户发表的高分文章,谢谢!


Q:贵公司RNA pulldown试剂盒是否包含探针呢

A:

含;转录调控及转录后调控系列试剂盒均不包含探针


Q:对于难转染的细胞,应该如何提高其转染效率?转染效率又该如何确定?

A:1)对于贴壁细胞,采用转染试剂转染即可;

   2)对于比较难转染的细胞,为提高转染效率,可选购特殊要求的转染试剂或者使用电转的方法,

      但是由于电转的方法对细胞损伤比较大,该方法未必是最佳的;

   转染效率的确定,常用的是使用荧光标记的siRNA,通过荧光显微镜,共聚焦显微镜,流式细胞

   仪检测等方法,但最终以达到基因过表达或者干扰的效率为准。


Q:基因为什么要强调mRNA水平检测?可以直接检测蛋白和功能吗?

A:常规的基因检测需要做到mRNA水平和蛋白水平同时说明,对于RNAi实验,由于siRNA直接作

   用于mRNA,因此mRNA水平检测是最直接在指标。

   一般认为,mRNA的降解直接的结果应该是对应蛋白质含量的下降,所以在蛋白水平的检测结果

   也应该可以作为有效性的检测指标。实际情况往往出现mRNA下降水平与蛋白下降水平不对应的现象。

   可能原因有:

   1)检测时间:存在mRNA的下降尚未反映在蛋白量的变化上或者未达到足以检测的可能,一般建

      议蛋白和功能检测时间做调整退后。

   2)蛋白在细胞中的表达情况:mRNA的翻译过程非常复杂,细胞内基因的表达总要维持一个平衡,

      某些蛋白表达量到一定的程度之后,足以维持其细胞功能,将可能暂时“关闭”表达的功能,转

      录出来的部分mRNA可能不参与蛋白翻译的过程,因此,mRNA水平的下调与蛋白水平下调并非

      完全成正相关的关系。

   3)另外还可能会涉及到更加复杂的机制。


Q:RNAi中转染时该如何分组?分组的目的是什么?

A:A组(必需) 针对目的基因siRNA knockdown目的基因的表达

   B组(必需) 阴性对照siRNA 用非特异的siRNA序列证明RNAi作用的序列特异性

   C组(必需) 转染试剂对照 排除转染试剂对细胞的毒性或对目的基因表达的影响

   D组(必需) 空白对照 用于检测实验过程中细胞的生长状态

   E组(可选) 阳性对照siRNA 用于排除实验体系和实验操作的问题

   F组(可选) 荧光对照siRNA 用于转染效率判断,当不明确细胞转染效率时,这一组为必需。


Q:RNAi效率多高才是好的靶点?

A:没有明确的界定,干扰效率高低因不同的细胞类型和不同的基因而异。不同细胞类型的转染效率

    也不尽相同,不同基因的表达水平也相差较大,主要看干扰效果而定。


Q:基因沉默/过表达效果不理想,应该如何处理?

A:最常见的影响沉默效果的两个原因是:转染效率低和siRNA序列设计的效果不理想。如果您初次

   使用siRNA或采用了新的细胞系,并发现沉默效果不佳,我们建议您对转染效率进行检测,并选择

   优化转染条件。如果您已经对实验转染条件进行优化但是问题依然存在,我们建议您换用另一种转

   染试剂或是采用其他技术,这也许能提高转染效率。如果已经提高了转染效率但是沉默效果仍然未

   达到要求,可能是因为siRNA序列设计的效果不理想。




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