miR-3188 regulates nasopharyngeal carcinoma proliferation and chemosensitivity through aFOXO1-modulated positive feedback loop with mTOR–p-PI3K/AKT-c-JUN
发布时间 :2016-07-05
研究对象:miR-3188 期刊:nature communications 影响因子:11.47 合作单位:南方医科大学 发表时间:2016年4月

摘要

The biological role of miR-3188 has not yet been reported in the context of cancer. In this study, we observe that miR-3188 not only reduces cell-cycle transition and proliferation, but also significantly prolongs the survival time of tumour-bearing mice as well as sensitizes cells to 5-FU. Mechanistic analyses indicate that miR-3188 directly targets mTOR to inactivate p-PI3K/p-AKT/c-JUN and induces its own expression. This feedback loop further suppresses cell-cycle signalling through the p-PI3K/p-AKT/p-mTOR pathway. Interestingly, we also observe that miR-3188 direct targeting of mTOR is mediated by FOXO1 suppression of p-PI3K/p-AKT/c-JUN signalling. In clinical samples, reduced miR-3188 is an unfavourable factor and negatively correlates with mTOR and c-JUN levels but positively correlates with FOXO1 expression. Our studies demonstrate that as a tumour suppressor, miR-3188 directly targets mTOR to stimulate its own expression and participates in FOXO1-mediated repression of cell growth, tumorigenesis and NPC chemotherapy resistance


关键词:miR-3188;肿瘤;细胞周期;mTORp-PI3K/p-AKT/p-mTOR通路;FOXO1


研究背景:

miRNA在发育,细胞分化,增殖,细胞周期控制和细胞死亡中发挥中重要的作用。miRNA也与很多疾病有着紧密的关系,这些疾病包括肿瘤。在众多的miRNA中,miR-3188在肿瘤起始和进展中的作用并没有得到深入的研究。

鼻咽癌是起源于鼻腔上皮细胞的一种肿瘤类型,在东亚和非洲的某些区域常见,其与很多因素相关,包括病毒,饮食和遗传背景等,近年来发现miRNA也在这类肿瘤的发生中起着重要的作用。例如,病毒编码的miRNA BART1通过调控PTEN依赖的信号通路诱导肿瘤的恶化。

FOXO1是转录因子,具有肿瘤抑制因子的作用,其可以被AKT1磷酸化失活,介导其由细胞核进入细胞质。最近的发现表明LMP1的抗癌活性是通过AKT1和下游的磷酸化FOXO1信号通路实现的。但是FOXO1的抗肿瘤的信号通路并没有深入的研究。

本研究发现miR-3188靶向鼻咽癌细胞中的mTORFOXO1,发现FOXO1 miR-3188-mTOR–p-PI3K/AKT-c-JUN信号通路,这条通路被FOXO1调节。激活这条通路抑制肿瘤的增殖,增加其对5氟尿嘧啶的敏感性。


技术流程图:


伯信合作技术

EMSAChIP-PCR实验共同确认miR-3188上的c-JUN转录因子结合位点:

cEMSA实验:提取SUNE1HONE1-EBV细胞的核蛋白,分别与不同的DIG-ddUTP-标记的寡核苷酸探针 (lanes 2–6, 8–12)孵育,在lanes 1 7中,用自由探针标记的c-JUN作为对照。lanes 6 12,相对于lanes 2 8是加入了100倍过量的非标记的c-JUN-WT探针竞争c-JUN的结合;lanes 3-5,lanes 9-11相对于lanes 2 8是加入了100倍过量的非标记的突变的c-JUN-A, c-JUN-B 和 c-JUN-C探针。

dChIP实验:通过c-JUN抗体的ChIPChIP产物分别通过PCR扩增c-JUN的结合位点A,BC,凝胶电泳的结果证实了miR-3188的启动子区域具有c-JUN转录因子结合位点。



原位杂交实验证实miR-3188 NPC NP 样品中的表达.

(a) NP 样品中miR-3188低表达; (b) NP 样品中miR-3188高表达

(c) NPC 样品中不表达miR-3188; (d) NPC 样品中高表达miR-3188. 标尺: 30 mm.


参考文献

Zhao M, Luo R, Liu Y, et al. miR-3188 regulates nasopharyngeal carcinoma proliferation and chemosensitivity through a FOXO1-modulated positive feedback loop with mTOR-p-PI3K/AKT-c-JUN[J]. Nature Communications, 2016, 7.

原文链接

http://www.nature.com/articles/ncomms11309


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